Ифнс расчет патента: Рассчитать стоимость патента поможет электронный сервис «Налоговый калькулятор – расчет стоимости патента» | ФНС России

Рассчитать стоимость патента поможет налоговый калькулятор.

Межрайонная ИФНС России №5 по Республике Крым доводит до сведения налогоплательщиков, что на официальном сайте ФНС России функционирует электронный сервис «Налоговый калькулятор – расчет стоимости патента».

Сервис позволяет индивидуальным предпринимателям, перешедшим или только планирующим перейти на патентную систему налогообложения, рассчитать сумму и сроки уплаты налога в связи с применением данного режима налогообложения.

Для этого необходимо заполнить выпадающие строки меню:

— период;

— количество месяцев использования патента;

— муниципальное образование;

— интересующий вид деятельности;

— дополнительный параметр, установленный для некоторых видов деятельности (количество обособленных объектов, транспортных средств, площадь объекта, средняя численность наемных работников и т.д.), а также выбрать соответствующий субъект Российской Федерации.

Обращаем внимание на особенности работы сервиса: при расчете стоимости патента налогоплательщиками в графу «Средняя численность наемных работников» вносится средняя численность работников, включая индивидуального предпринимателя (человек).

По результатам расчета можно узнать предполагаемую к уплате сумму налога для определенного вида предпринимательской деятельности и установленные сроки уплаты налога.

Напоминаем, что патентная система налогообложения может применяться только индивидуальными предпринимателями. На территории Республики Крым принят Закон от 06.06.2014 № 19-ЗРК «О патентной системе налогообложения». Законом Республики Крым от 05.10.2016 № 278-ЗРК/2016 внесены изменения в законодательство о патентной системе налогообложения на территории Крыма. Формула расчета патента проста и прозрачна. Стоимость патента рассчитывается, исходя из потенциально возможной доходности от того или иного бизнеса. Для каждого вида предпринимательской деятельности определен размер потенциально возможного к получению годового дохода, являющегося налоговой базой, с которого исчисляется налог по ставке 4%, вместо установленных Налоговым кодексом 6%. Пониженная ставка на территории Республики Крым действует согласно принятому закону Республики Крым в отношении периодов 2017-2021 годов.

Начальник Межрайонной ИФНС России № 5

по Республике Крым

В. Мешкова   

Раздел 5. Патентная система налогообложения (ПСН) / КонсультантПлюс

ПСН действует с 01.01.2013.

Физическое лицо подает заявление на получение патента одновременно с документами на государственную регистрацию в качестве индивидуального предпринимателя, если физическое лицо планирует со дня его государственной регистрации в качестве индивидуального предпринимателя осуществлять предпринимательскую деятельность на основе патента в субъекте РФ, на территории которого такое лицо состоит на учете в налоговом органе по месту жительства. В этом случае действие патента, выданного индивидуальному предпринимателю, начинается со дня его государственной регистрации (патент или уведомление об отказе в выдаче патента выдается (направляется) налоговым органом в течение 5 дней со дня получения заявления на получение патента, либо со дня государственной регистрации физического лица в качестве индивидуального предпринимателя, государственная регистрация в качестве индивидуального предпринимателя осуществляется в срок не более чем 3 рабочих дней со дня представления документов в налоговый орган).Индивидуальный предприниматель подает заявление на получение патента не позднее чем за 10 дней до начала применения ПСН.Форма заявления на получение патента N 26.5-1, формат представления заявления на получение патента в электронной форме, порядок заполнения формы заявления на получение патента утверждены Приказом ФНС России от 09.12.2020 N КЧ-7-3/891@.Индивидуальные предприниматели, применяющие ПСН, обязаны вести книгу учета доходов и расходов (книга и порядок ее заполнения утверждены Приказом Минфина России от 22.10.2012 N 135н).Индивидуальные предприниматели, применяющие ПСН, направляют уведомление об уменьшении суммы налога, на сумму указанных в п. 1.2 ст. 346.51 НК РФ страховых платежей (взносов) и пособий, в случае их уплаты в пользу работников, занятых в тех сферах деятельности налогоплательщика, по которым уплачивается налог в связи с применением ПСН. Форма, формат и порядок представления уведомления утверждены Приказом ФНС России от 26.03.2021 N ЕД-7-3/218@. См. письмо ФНС России от 19.07.2021 N СД-4-3/10101@ по вопросу заполнения уведомления.Классификатор видов предпринимательской деятельности, в отношении которых законом субъекта Российской Федерации предусмотрено применение патентной системы налогообложения (КВПДП) утвержден Приказом ФНС России от 15.01.2013 N ММВ-7-3/9@.В случаях утраты права на применение ПСН по основаниям, указанным в пп. 1 и пп. 2 п. 6 ст. 346.45 НК РФ, в течение 10 календарных дней со дня утраты права или прекращения предпринимательской деятельности:- о переходе на общий режим налогообложения подается заявление об утрате права на применение ПСН и сведения об имеющихся патентах на право применения ПСН с неистекшим сроком действия;- о прекращении предпринимательской деятельности, в отношении которой применялась ПСН, подается заявление по форме утвержденной Приказом ФНС России от 04.12.2020 N КЧ-7-3/882@.

 

Указатель по разделу 5:

5.2. Освобождение от уплаты налогов индивидуальных предпринимателей, применяющих ПСН;5.3. Уплата патента, налогов и сборов;5.5. Письма, разъясняющие применение ПСН.

Открыть полный текст документа

Информация для субъектов малого и среднего предпринимательства

 

ПАТЕНТ для индивидуальных предпринимателей

Патентная система налогообложения представляет собой упрощенный порядок расчета сумм налога, его уплаты и представления отчетности.

Применение патентной системы налогообложения предусматривает освобождение от обязанности по уплате (п. 10, п.11 ст.346.43 НК РФ):

• Налог на доходы физических лиц
  В части доходов, полученных при осуществлении видов предпринимательской деятельности, в отношении которых применяется патентная система налогообложения

• Налог на имущество физических лиц
  В части имущества, используемого при осуществлении видов предпринимательской деятельности, в отношении которых применяется патентная система налогообложения

• НДС
  За исключением НДС, подлежащего уплате:

  • при осуществлении видов предпринимательской деятельности, в отношении которых не применяется патентная система налогообложения

  • при ввозе товаров на территорию Российской Федерации и иные территории, находящиеся под ее юрисдикцией

Документ, удостоверяющий право на применение патентной системы

— Это патент на осуществление 1 из видов предпринимательской деятельности, который действует на территории того муниципального образования, городского округа, города федерального значения или субъекта Российской Федерации, который указан в патенте (п. 1 ст.346.45 НК РФ).

Форма патента на право применения патентной системы налогообложения утверждена Приказом ФНС России 26.11.2014 № ММВ-7-3/599@

При ведении индивидуальным предпринимателем нескольких видов предпринимательской деятельности патент необходимо приобретать на каждый из видов деятельности отдельно.

Законодательством определены 63 вида деятельности, по которым возможно приобретение патента.

Процедура перехода на патентную систему налогообложения

Заявление на получение патента необходимо подать не позднее чем за 10 дней до начала применения патентной системы налогообложения.

В течение 5 дней со дня получения заявления на получение патента налоговый орган обязан выдать индивидуальному предпринимателю патент или уведомить его об отказе в выдаче патента (п. 3 ст. 346.45 НК РФ).

Налог исчисляется как соответствующая налоговой ставке процентная доля налоговой базы.

В случае получения индивидуальным предпринимателем патента на срок менее двенадцати месяцев налог рассчитывается путем деления размера потенциально возможного к получению индивидуальным предпринимателем годового дохода на двенадцать месяцев и умножения полученного результата на количество месяцев срока, на который выдан патент.

Преимущества получения патента:

• нет необходимости представлять отчетность в налоговый орган;

• оплата стоимости патента осуществляется в два срока;

• период действия патента по выбору от 1 месяца до 1 года;

Дополнительную информацию о применении патентной системы налогообложения можно получить на официальном сайте ФНС России http://www.nalog.ru/docs

 

Реквизиты, необходимые для перечисления налога

Наименование получателя	УФК по Красноярскому краю (Межрайонная ИФНС России №25 по Красноярского края)
ИНН получателя	2457057377
КПП получателя	245701001
Номер счета получателя	40101810600000010001
Наименование банка	ГРКЦ ГУ Банка России по Красноярскому кр. г. Красноярск
БИК банка получателя	040407001
ОКТМО г. Норильск	04729000
КБК налога, взимаемого в виде стоимости  патента	182 1 05 04010 02 1000 110

ИНТЕРВЬЮ ЗАМЕСТИТЕЛЯ НАЧАЛЬНИКА МЕЖРАЙОННОЙ ИНСПЕКЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЙ НАЛОГОВОЙ СЛУЖБЫ РОССИИ № 22 ВИКТОРА АНАТОЛЬЕВИЧА УФИМЦЕВА ПО ИНТЕРНЕТ-СЕРВИСАМ

26.02.2015

ИНТЕРВЬЮ ЗАМЕСТИТЕЛЯ НАЧАЛЬНИКА МЕЖРАЙОННОЙ ИНСПЕКЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЙ НАЛОГОВОЙ СЛУЖБЫ РОССИИ № 22 ВИКТОРА АНАТОЛЬЕВИЧА УФИМЦЕВА ПО ИНТЕРНЕТ-СЕРВИСАМ

1. С помощью каких интернет – сервисов можно заполнить налоговую декларацию по налогу на доходы физических лиц?

— с помощью бесплатной программы «Декларация», которая размещена на сайте www.nalog.ru в разделе «Физическим лицам» — «Программное обеспечение. В процессе заполнения данных, программа автоматически проверяет их корректность, что уменьшает вероятность появления ошибки.

— в интернет — сервисе «Личный кабинет для налогоплательщиков физических лиц» и направить ее в налоговый орган, подписанную электронной подписью налогоплательщика, а также отследить статус камеральной проверки декларации. Использовать сервис для сдачи декларации без электронной подписи граждане смогут только с 01.07.2015г.

2. Какую еще дополнительную информацию можно получить с помощью сервиса «Личный кабинет налогоплательщика для физических лиц»?

С его помощью налогоплательщик может также получать актуальную информацию об объектах имущества и транспортных средствах, о суммах начисленных и уплаченных налоговых платежей, о наличии переплат, о задолженности по налогам перед бюджетом; контролировать состояние расчетов с бюджетом, получать и распечатывать налоговые уведомления и квитанции на уплату налоговых платежей, оплачивать налоговую задолженность и налоговые платежи (до наступления срока уплаты.

Доступ к сервису осуществляется с помощью логина и пароля. Получить регистрационную карту, содержащую логин и пароль, можно лично в любой инспекции ФНС России, независимо от места постановки на учет.

Дополнительно информируем, что Управлением Федеральной налоговой службы по Челябинской области разработаны и размещены на сайте ФНС России www.nalog.ru/rn74/ в разделе «Электронные услуги» интернет-сервисы: «Декларация о доходах», «Узнай индекс документа», «Налоговый калькулятор» (расчет стоимости патента, расчет транспортного налога, расчет ЕНВД, расчет пени).

3. А для юридических лиц создан сервис «личный кабинет»?

Да. Запуск «Личного кабинета для юридических лиц» — еще один шаг навстречу налогоплательщикам, призванный повысить качество предоставления государственных услуг. Сервис позволяет налогоплательщикам узнавать о задолженности по налогам перед бюджетом, суммах начисленных и уплаченных налогов, наличии переплат, невыясненных платежей; составлять и направлять в налоговые органы заявления на уточнение платежа, заявления о зачете/возврате переплаты; получать справку о состоянии расчетов и акт совместной сверки расчетов по налогам, сборам, пеням и штрафам, выписку из ЕГРЮЛ в электронном виде в отношении самих себя; подавать запрос на получение справки об исполнении налогоплательщиком обязанности по уплате налогов, сборов, пеней и налоговых санкций; отслеживать ход исполнения заявлений и запросов и принимать документы, составленные налоговым органом по направленным заявлениям: извещение о принятии решения о зачете (возврате) сумм излишне уплаченных (излишне взысканных) налогов, пеней, штрафов или об отказе в таком зачете (возврате), извещение о принятом решении об уточнении платежа или об отказе в уточнении платежа.

Большой популярностью пользуется сервис «Разъяснения Федеральной налоговой службы, обязательные для применения налоговыми органами», содержащий разъяснительные письма по применению законодательства Российской Федерации о налогах и сборах. Налогоплательщики могут узнавать о правилах применения тех или иных налоговых норм. База данных сервиса каждую неделю пополняется актуальными разъяснениями по вопросам методологии исчисления и уплаты всех налогов и сборов.

Уважаемый налогоплательщик! Ознакомься с электронными сервисами на сайте ФНС России www.nalog.ru:

23.11.2017

Уважаемый налогоплательщик! Ознакомься с электронными сервисами на сайте ФНС России www.nalog.ru:

«Личный кабинет налогоплательщика для физического лица» —

(информация о задолженности перед бюджетом, начисления по имущественным налогам (транспорт, имущество, земля), заполнить декларацию по форме 3-НДФЛ и отправить декларацию без посещения налоговой инспекции, имея неквалифицированную электронную подпись)

«Личный кабинет налогоплательщика индивидуального предпринимателя»

«Личный кабинет налогоплательщика юридического лица»-

позволяет получать актуальную информацию о задолженности по налогам перед бюджетом, контролировать состояние расчетов с бюджетом; взаимодействовать с налоговыми органами в электронном виде.

«Справочная информация о ставках и льготах по имущественным налогам» —

Информация о ставках и льготах имущественных налогов (транспорт, земля, имущество)

«Заполнить платежное поручение» —

(сформировать платежный документ на уплату налогов)

«Заплати налоги» –

(возможность внести платежи через Интернет без комиссий)

«Онлайн запись на прием в налоговый орган»

(предоставляет возможность всем категориям налогоплательщиков записаться на прием в налоговый орган на любую услугу, спланировав визит в налоговый орган заранее)

«Калькулятор транспортного налога ФЛ»

(для физических лиц — расчет транспортного налога)

«Налоговый калькулятор земельного налога и налога на имущество физических лиц, исчисляемых исходя из кадастровой стоимости»

(Сервис позволяет рассчитать сумму земельного налога и налога на имущество физических лиц)

«Налоговый калькулятор – расчет стоимости патента»

(позволяет индивидуальным предпринимателям рассчитать сумму налога, уплачиваемого в связи с применением патентной системы налогообложения)

Регион «74- Челябинская область»:

«Налоговый калькулятор – расчет суммы ЕНВД для отдельных видов деятельности»

(расчет для отдельных видов деятельности суммы ЕНВД)

«Проверь индекс платежа»

(сервис предназначен для физических лиц – плательщиков транспортного и земельного налогов, налога на имущество физических лиц, получивших при использовании индекса платежа ошибку «Введен некорректный номер индекса»)

«Налоговый калькулятор – расчет пени по налогам»

(Сервис позволяет самостоятельно рассчитать пени на сумму неуплаченного или несвоевременно уплаченного налога)

Вопрос-ответ

Вопрос

Здравствуйте! В связи с карантином, объявленным на территории Краснодарского края, будет ли продление сроков уплаты налогов и сборов?

Ответ

        Алла Александровна, спасибо за Ваш вопрос! ФНС России по поручениям Президента и Правительства Российской Федерации реализовала меры поддержки налогоплательщиков на время снижения деловой и потребительской активности на фоне распространения коронавирусной инфекции (Постановление Правительства РФ от 02.04.2020 №409 «О мерах по обеспечению устойчивого развития экономики»).
С информацией о мерах поддержки бизнеса  Вы также можете ознакомиться на сайте ФНС России в разделе «Коронавирус: меры поддержки бизнеса», доступной по ссылке https://www.nalog.ru/rn77/buisness-support-2020/.

Вопрос

Здравствуйте! Я являюсь предпринимателем, насчет карантина сейчас сидим дома, так как запрещено наша дальнейшая деятельность до конца карантина, вопрос у меня такой налоги у нас отменили временно?

Ответ

        Жирайр Ваганович, спасибо за Ваш вопрос! ФНС России по поруче-ниям Президента и Правительства Российской Федерации реализовала ме-ры поддержки налогоплательщиков на время снижения деловой и потре-бительской активности на фоне распространения коронавирусной инфек-ции (Постановление Правительства РФ от 02.04.2020 №409 «О мерах по обеспечению устойчивого развития экономики»).
С информацией о мерах поддержки бизнеса  Вы также можете озна-комиться на сайте ФНС России в разделе «Коронавирус: меры поддержки бизнеса», доступной по ссылке https://www.nalog.ru/rn77/buisness-support-2020/.

Вопрос

Можно узнать ставку земельного налога по Тихорецкому району земель сельскохозяйственного назначения 1-й группы?

Ответ

Виктория, спасибо за Ваш вопрос! Согласно ст. 387 НК РФ при установлении земельного налога нормативными правовыми актами представительных органов муниципальных образований могут устанавливаться налоговые ставки, налоговые льготы, основания и порядок их применения. В соответствии с Решением Советов сельских поселений Тихорецкого района, ставки установлены для каждого сельского поселения.

Вопрос

Здравствуйте! У меня такой вопрос .Меняется ли стоимость земельного налога в ст. Новорождественской в зависимости от места проживания? Т.е. нахождение земельного участка в центре или на окраине станицы?

Ответ

Марина, спасибо за Ваш вопрос! Пунктом 11 статьи 396 Налогового кодекса Российской Федерации определено, что органы, осуществляющие ведение государственного земельного кадастра, и органы, осуществляющие государственную регистрацию прав на недвижимое имущество и сделок с ним, представляют информацию в налоговые органы в соответствии с пунктом 4 статьи 85 настоящего Кодекса, которая содержит сведения о расположенном на подведомственной им территории недвижимом имуществе, зарегистрированном в этих органах, о стоимости объектов и сведения об их владельцах в налоговые органы по месту своего нахождения.

Ответ

Легализация объектов налогообложения – одна из приоритетных задач налоговых органов Краснодарского края

Управлением Федеральной налоговой службы по Краснодарскому краю и территориальными инспекциями края в рамках работы по обеспечению поступлений налогов и сборов, формирующих, в том числе, доходную часть консолидированного бюджета края, на постоянной основе осуществляется комплекс мер, направленных на легализацию налоговой базы.

Данные мероприятия направлены на побуждение налогоплательщиков, имеющих низкую налоговую нагрузку по налогам, отражающих необоснованные убытки в налоговых декларациях, а также имеющих другие риски совершения налоговых правонарушений к уточнению налоговых обязательств.

Одна из основных задач налоговых органов края – выявление сокрытой налоговой базы и недостоверной информации при расчете налогов.

Сегодня на Кубани проживает свыше 3 млн. человек в трудоспособном возрасте. Из них 600 тысяч официально не трудоустроены и не отчисляют в бюджет НДФЛ. При этом пользуются всеми благами, которые создаются за счет честных налогоплательщиков. Это бесплатная медицина и образование, меры соц. поддержки, дороги и транспорт.

«Белая» заработная плата – это Ваши настоящие и будущие социальные гарантии.

Ваше молчаливое согласие позволяет недобросовестным работодателям использовать сложившуюся ситуацию в своих интересах и недоплачивать налоги в бюджетную систему и внебюджетные фонды.

Выведи зарплату из тени!

S95021, новое селективное и пан-нейтрализующее моноклональное антитело против интерферона альфа (IFN-α) в качестве кандидата для лечения некоторых аутоиммунных ревматических заболеваний

Основные моменты

•

Интерферон-α (IFN-α) является ключевым патогенный игрок при нескольких аутоиммунных заболеваниях.

•

S95021 — новое, естественное, полностью человеческое, селективное моноклональное антитело (mAb) против пан IFN-α.

•

S95021 обладает высокой аффинностью связывания со своей мишенью, достигая пикомолярных значений KD для всех подтипов IFN-α.

•

S95021 сильно подавляет сигнатуру гена IFN типа I в иммунных клетках аутоиммунных пациентов.

•

S95021 предлагается в качестве многообещающего кандидата для лечения аутоиммунных заболеваний, вызываемых IFN-α.

Реферат

Повышенная продукция интерферона-α (IFN-α) является важным компонентом патофизиологии системной красной волчанки (СКВ) и других ревматических аутоиммунных заболеваний. В данном документе мы описываем характеристику S95021, полностью человеческого моноклонального антитела (mAb) против IFN-α IgG1 в качестве нового терапевтического кандидата для целевых групп пациентов.S95021 был экспрессирован в клетках CHOZN GS — / -, очищенных хроматографией и охарактеризованных с помощью электрофореза, эксклюзионной хроматографии и жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии. S95021 высокой чистоты был получен как мономерное соединение, содержащее различные варианты заряда, в основном за счет гликозилирования N . Эксперименты по кинетике поверхностного плазмонного резонанса показали высокую степень ассоциации со всеми подтипами IFN-α и оцененные значения KD ниже пикомолярных значений. Пан-IFN-α-связывающие свойства были подтверждены анализами иммунопреципитации и нейтрализующей способности с репортерными клетками HEK-Blue IFN-α / β.S95021 был IFN-α-селективным и продемонстрировал превосходную эффективность и более широкий профиль нейтрализации по сравнению с эталонными анти-IFN-α mAb, ритонализумабом и сифалимумабом. Фосфорилирование STAT-1 и сигнатура гена IFN типа I, индуцированные в мононуклеарных клетках периферической крови человека рекомбинантными подтипами IFN-α или плазмой от выбранных аутоиммунных пациентов, эффективно снижались с помощью S95021 дозозависимым образом. В совокупности наши результаты показывают, что S95021 представляет собой новое сильнодействующее, селективное и пан-IFN-α-нейтрализующее mAb.В настоящее время он дополнительно оценивается как действительный терапевтический кандидат при выбранных аутоиммунных заболеваниях, при которых нарушена регуляция провоспалительного пути IFN-α.

Ключевые слова

Интерферон-альфа

Биологическая терапия

Аутоиммунные заболевания

Системная красная волчанка

Первичный синдром Шегрена

Рекомендуемые статьиЦитирующие статьи (0)

© 2021 Авторы. Опубликовано Elsevier B.V.

Рекомендуемые статьи

Цитирующие статьи

Влияние преднизона на сигнатуру интерферона I типа при ревматоидном артрите: последствия для прогнозирования ответа на ритуксимаб | Исследования и терапия артрита

Предыдущие исследования показали, что IFN-оценка имеет клиническую значимость, поскольку позволяет прогнозировать исход терапии RTX; высокий показатель IFN, отражающий повышенную экспрессию IRG на исходном уровне, связан с плохим клиническим ответом на RTX [2,3].В настоящем исследовании мы продемонстрировали, что средний показатель IFN был постоянно ниже у пациентов, принимавших преднизон, по сравнению с пациентами, не принимавшими преднизон. Как следствие, прогнозирование ответа RTX на основе IFN-показателя было значительно улучшено при стратификации пациентов на основе использования преднизона. ROC-анализ группы PREDN ^—, основанный на IFN-шкале трех IRG, дал почти идеальную AUC, равную 0,975, по сравнению с 0,848 и 0,797 у всех пациентов или принимавших только преднизон, соответственно.Это означает, что тест, основанный на оценке IFN с тремя IRG, правильно классифицирует 98% из двух пациентов PREDN ^— из двух случайно выбранных пар, что считается «отличным». На основании этих данных отсутствие ответа на RTX может можно прогнозировать со специфичностью 100% и чувствительностью 88% у пациентов PREDN ^—.

На данный момент модель прогнозирования RTX на основе IFN-показателей кажется наиболее разборчивым тестом для прогнозирования ответа RTX и уже продемонстрировала клиническую полезность [3,11].Текущие данные показывают, что модель может быть дополнительно оптимизирована с помощью стратификации для использования преднизона. Было доказано, что терапия ГК является жизненно важной частью лечения РА [1] и часто назначается в качестве промежуточной терапии между биологическими препаратами для предотвращения или подавления воспалительных обострений. Наблюдение за тем, что предсказание ответа RTX достигло оптимальной прогностической ценности у пациентов без текущего лечения преднизоном, предполагает, что связанное с преднизоном подавление IFN-показателя скрывает «подлинную» внутреннюю экспрессию IRG, что приводит к более низкой точности предсказания.Поскольку прекращение использования преднизона у пациентов с РА было бы практически невыносимым, включение использования преднизона и / или его дозы в модель прогнозирования на основе IFN-баллов может быть подходом для оптимизации прогнозирования результатов лечения. В конце концов, можно было бы рассмотреть возможность постепенного снижения или временного прекращения лечения преднизоном, чтобы измерить «подлинную» внутреннюю экспрессию IRG и предсказать ответ на лечение RTX, если это позволяет клиническое состояние пациента. Текущие данные дают первое представление о влиянии истории приема лекарств на прогноз ответа.Исследование состояло из поперечных данных, и результаты должны быть подтверждены в более крупной проспективной когорте пациентов с РА, отобранных до и после лечения ГК. Кроме того, помимо истории приема лекарств, следует также проанализировать влияние совокупной дозы и срока лечения преднизоном.

Наши данные о супрессивном эффекте in vivo преднизона на экспрессию IRG при RA подтверждают результаты механистических исследований, в которых сообщалось о влиянии GC на систему IFN типа I.При системной красной волчанке (СКВ) инъекция метилпреднизолона совпадала с уменьшением количества плазмоцитоидных дендритных клеток (пДК), которые считаются основными продуцентами IFNα при СКВ [12,13]. При РА имеются доказательства роли как IFNα, так и IFNβ [14,15], что указывает на более широкое клеточное происхождение этих IFN, что делает маловероятным, что связанное с преднизоном подавление IRG при RA вызвано исключительно снижением pDC.

Поскольку ГК способны вмешиваться в пути IRF3 и IRF9, тем самым влияя на индукцию IFNα / β и / или передачу сигналов нижележащего рецептора IFN (IFNAR), это может привести к подавлению продукции IFN типа I, а также индукции нижестоящего IRG.Такое подавление вызывается взаимодействием GRIP1 / NCOA2 — кофактора передачи сигналов GC — с IRF3 и IRF9 и последующей интерференцией между передачей сигналов GR и передачей сигналов TLR и передачей сигналов IFNAR, соответственно [6,7]. Кроме того, было продемонстрировано, что GC способны индуцировать экспрессию SOCS1 [16], хорошо известного ингибитора передачи сигналов JAK-STAT, включая передачу сигналов IFN типа I [17]. Поскольку передача сигналов TLR и JAK-STAT участвует в регуляции активности IFN типа I при RA [18,19], это может быть дополнительным механизмом наблюдаемого подавления IRG, связанного с преднизоном.Однако наше исследование не было направлено на раскрытие механизмов GC-опосредованной супрессии IFN типа I, что является целью будущих исследований.

Наши наблюдения вызывают вопросы относительно связи между высоким исходным уровнем экспрессии IRG и плохим ответом на RTX. Пока неясно, является ли высокая экспрессия IRG (не) прямой причиной отсутствия ответа на RTX или это связано с эпифеноменом. В случае причинной связи между высоким исходным уровнем экспрессии IRG и отсутствием ответа на RTX можно было бы ожидать, что использование преднизона в качестве супрессора экспрессии IRG приведет к увеличению числа респондеров.Этого не наблюдалось в нашей когорте, о чем свидетельствует описанное отсутствие прямой связи между использованием преднизона и клиническим ответом на RTX [3]. Более того, мы не наблюдали какой-либо систематической ошибки в клинических параметрах между подгруппами, принимавшими преднизон, и ответом на прием RTX. Поскольку количество пациентов в подгруппе невелико, это может быть связано с недостатком мощности. Однако наши данные показывают, что разница в точности прогноза между пациентами PREDN ^— и PREDN ⁺ выборочно связана с подавлением IRG, связанным с преднизоном, у не отвечающих на RTX, что приводит к ложноположительным хорошим ответам в PREDN ⁺ . группа, в то время как респонденты почти полностью отличаются от не отвечающих в группе PREDN ^—.В целом, эти наблюдения указывают на то, что пациенты с высоким уровнем IFN ^и , принимающие преднизон, могут выглядеть как пациенты с низким уровнем IFN ^, из-за связанной с преднизоном супрессии IRG, но все же оказываются не отвечающими на RTX. Это, в свою очередь, означало бы, что связь между высокой экспрессией IRG и не отвечающими на RTX не является прямой причинной.

Помимо связи между исходной экспрессией IRG и ответом на RTX, есть указания на фармакодинамические различия во время терапии RTX.Vosslamber и др. . предоставили доказательства того, что у респондентов RTX, то есть пациентов с низким исходным уровнем экспрессии IRG, наблюдалась повышающая регуляция IRG после трех месяцев терапии, в то время как у пациентов, не ответивших на RTX, этого не наблюдалось [20], что позволяет предположить, что динамика IFN типа I связана с клиническим исходом RTX. лечение. Было высказано предположение, что высокая экспрессия IRG до лечения RTX может отражать чрезмерно стимулированную систему IFN типа I, неспособную в дальнейшем индуцировать экспрессию IRG, которая необходима для достижения благоприятного ответа на RTX.Что касается интерференции преднизона, можно предположить, что этот процесс насыщения пути, возможно, вызванный обширной отрицательной обратной связью или нехваткой сигнальных белков, может быть синергетически усилен преднизоном. Это могло бы затем привести к отсутствию индукции IRG во время терапии RTX, несмотря на относительно низкую экспрессию IRG на исходном уровне. Интересно, что большинство пациентов в исследовании Vosslamber et al . использовала преднизон (82%), и пациентам разрешили продолжать его использование во время терапии RTX [20].Более того, наблюдаемая фармакологическая индукция экспрессии IRG во время терапии RTX была описана независимо от клинических параметров, таких как использование преднизона [20], что позволяет предположить, что она сохранялась, несмотря на вмешательство GC. Это, в свою очередь, может означать, что экспрессия IRG, индуцированная во время лечения RTX, происходит по другому механизму, чем экспрессия IRG на исходном уровне, которая оказалась чувствительной к вмешательству преднизона.

Наши данные также могут быть полезны для других схем лечения, поскольку связь между системой IFN и ответом на лечение, по-видимому, не ограничивается RTX.Например, для терапии анти-TNF с помощью инфликсимаба динамика экспрессии IRG оказалась связанной с клиническим ответом, так как пациенты, не ответившие на лечение, показали повышенную регуляцию IRG во время лечения, тогда как пациенты с хорошим ответом — нет [21,22]. Кроме того, полногеномное исследование экспрессии показало, что высокая экспрессия IRG до начала лечения тоцилизумабом, блокатором IL-6R, связана с благоприятным ответом [23]. Характер реакции, наблюдаемый для этих биопрепаратов, не соответствует таковому для RTX.Хотя клиническая значимость этих результатов должна быть подтверждена в независимых исследованиях, это может указывать на то, что статус системы IFN может иметь различные клинические последствия при РА в зависимости от конкретного используемого биологического препарата, то есть иммунного пути, который модулируется. . Наши данные о in vivo вмешательстве преднизона в IFN-систему могут быть в равной степени актуальными для других биологических методов лечения и показаний, которые характеризуются различной активностью IFN. В этих случаях отдельный анализ пациентов PREDN ^— и PREDN ⁺ мог бы подтвердить эти утверждения.

Отчет об альфа и бета IFN Клетки HEK293

Репортерные клетки IFN человека типа I

HEK-Blue ™ IFN-α / β Передача сигналов клеток

Клетки HEK-Blue ™ IFN-α / β позволяют обнаруживать биоактивные интерфероны типа I человека (т.е. IFN-α и IFN-β ) путем мониторинга активации пути ISGF3.

IFN-α и IFN-β являются важными противовирусными цитокинами, которые также обладают антипролиферативными и иммуномодулирующими функциями [1, 2].Эти цитокины связывают рецептор клеточной поверхности, состоящий из двух субъединиц, IFNAR1 и IFNAR2, которые связаны с TyK2 и JAK1 соответственно [1]. При связывании с этим рецептором IFN типа I запускают путь JAK / STAT / ISGF3.

Подробнее

Описание клеточной линии:

Клетки HEK-Blue ™ IFN-α / β получали путем стабильной трансфекции клеток эмбриональной почки человека (HEK) -293 генами STAT2 и IRF9 человека для получения полностью активного пути передачи сигнала IFN типа I.Другие гены этого пути (IFNAR1, IFNAR2, JAK1, TyK2 и STAT1) естественным образом экспрессируются этими клетками. Клетки содержат индуцибельный репортерный ген SEAP (секретируемая эмбриональная щелочная фосфатаза) под контролем IFN-α / β-индуцибельного промотора ISG54.

Стимуляция IFN-α / β клеток HEK-Blue ™ человеческим IFN-α или IFN-β активирует путь JAK / STAT / ISGF3 и впоследствии индуцирует продукцию SEAP. Уровни SEAP легко оценить в супернатанте с помощью раствора QUANTI-Blue ™.

Кроме того, активация клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β человеческим IFN-α может быть заблокирована нейтрализующим моноклональным антителом, таким как анти-hIFN-α-IgG.

Характеристики клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β:

• Полнофункциональный сигнальный путь IFN-α / β
• Отвечает ли не на человеческий IFN-γ (IFN типа II)
• Легко оцениваемая активность репортера ПДУЭР
• Функционально протестировано и гарантировано отсутствие микоплазм

Применение клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β:

• Обнаружение человеческого IFN-α и IFN-β
• Скрининг антител против hIFN-α или анти-hIFN-β

Использованная литература:

1.Schreiber G. 2017. Молекулярные основы дифференциальной передачи сигналов интерферона I типа. J. Biol. Chem. 292: 7285-94.
2. McNab F. et al ., 2015. Интерфероны I типа при инфекционных заболеваниях. Nat Rev Immunol. 15 (2): 87-103.

Фигуры

Стимуляция клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β рекомбинантными человеческими IFN-α, IFN-β и IFN-γ. После 24-часовой инкубации активность SEAP оценивали с помощью раствора QUANTI-Blue ™ и считывали оптическую плотность (О.D.) при 655 нм.

Лиганд	EC50	Коэффициент отклика
hIFN-α	75 +/- 10 МЕ / мл	20
hIFN-β	10 +/- 2 МЕ / мл	20

Примечание. Коэффициент ответа рассчитывали путем деления OD при 655 нм для обработанных клеток на OD при 655 нм для необработанных клеток.

Клетки HEK-Blue ™ IFN-α / β стимулировали различными рекомбинантными цитокинами человека; IFNα (1000 МЕ / мл), IFNβ (1000 МЕ / мл), IFNγ (1000 МЕ / мл), IL-1β (100 нг / мл), IL-4 (100 нг / мл), IL-6 (100 нг / мл), IL-13 (100 нг / мл), IL-18 (100 нг / мл), TGF-β (10 нг / мл) и TNF-α (100 нг / мл). После 24-часовой инкубации активность SEAP оценивали с помощью раствора QUANTI-Blue ™ и считывая O.D. при 655 нм.

Анти-hIFN-α-IgA инкубировали с 500 МЕ / мл человеческого IFN-α в течение 30 минут перед добавлением клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β, которые инкубировали с антителом и цитокином еще 24 часа. часУровни SEAP в супернатанте измеряли с использованием раствора QUANTI-Blue ™ и считывая O.D. при 655 нм.

Вернуться к вершине

Технические характеристики

Устойчивость к антибиотикам: бластицидин, Zeocin ™

Питательная среда: DMEM, 4,5 г / л глюкозы, 2 мМ L-глутамина, 10% (об. / Об.) Инактивированной нагреванием фетальной бычьей сыворотки, 100 Ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина, 100 мкг / мл Нормоцина. ™

Гарантированное отсутствие микоплазм

Обнаруживает интерфероны человека I типа:

• Диапазон определения человеческого IFN-α: 1-10 ⁴ МЕ / мл
• Диапазон определения человеческого IFN-β: 10-10 ⁴ МЕ / мл

Вернуться к началу

Детали

Интерфероны типа I, в частности интерферон-альфа (IFN-α) и интерферон-бета (IFN-β), играют жизненно важную роль в устойчивости организма к вирусным инфекциям [1, 2].Семейство IFN типа I представляет собой семейство мультигенных цитокинов, которое кодирует 13 частично гомологичных подтипов IFN-α у людей (14 у мышей), один IFN-β и несколько плохо определенных продуктов одного гена (IFN-, IFN-τ , IFN-κ, IFN-ω, IFN-δ и IFN-ζ) [1, 2]. IFN-α и IFN-β являются наиболее определяемыми и наиболее широко экспрессируемыми IFN типа I [2].

IFN-β и все подтипы IFN-α связываются с гетеродимерным трансмембранным рецептором, состоящим из субъединиц IFNAR1 и IFNAR2, которые связаны с тирозинкиназами Tyk2 и Jak1 (киназа Janus 1) соответственно.Эти киназы фосфорилируют STAT1 и STAT2, которые затем димеризуются и взаимодействуют с регуляторным фактором 9 IFN (IRF9), что приводит к образованию комплекса ISGF3. ISGF3 связывается с IFN-стимулированными элементами ответа (ISRE) в промоторах IFN-стимулированных генов (ISG), чтобы регулировать их экспрессию.

Стимуляция клеток HEK-Blue ™ IFN-α / β человеческим IFN-α или IFN-β активирует путь JAK / STAT / ISGF3 и впоследствии индуцирует продукцию SEAP .